细胞膜染料–DiD,DiO,DiI,DiR 和 DiS

细胞膜染料–DiD,DiO,DiI,DiR 和 DiS

产品描述

DiD(CAS:127274-91-3),DiO(CAS:34215-57-1),DiI(CAS:41085-99-8),DiR(CAS:100068-60-8)和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料,可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强,这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色,这类染料在整个细胞膜上扩散,佳浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜色区分明显:DiI(橙色荧光),DiO(绿色荧光),DiD(红色荧光)和 DiR (深红色荧光)这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的 FITC和TRITC的滤光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激发,有着比DiI更长的激发波长和发射波长,在细胞和组织染色中更有价值。 DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织,在活体成像中用来示踪。

**DiR碘化物的发射波长肉眼不可见,所以需要配备CCD镜头或其他的近红外检测仪器。

Di系列染料想必大家一定不陌生,我们做细胞膜染色的时候经常会用到,今天给大家介绍下常见的4类Di染料:DiI, DiO, DiD 和 DiR,Di系列染料是一类环境敏感型亲脂性膜染料,这类探针在进入细胞膜之前荧光非常弱,当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子(例如蛋白质)结合时,其荧光强度显著增强。一旦应用于细胞中,这类染料会在细胞内质膜中逐步扩散,在其最佳浓度条件下,可以扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。

 

DiI, DiO, DiD 和 DiR被激发后可以发出不同颜色的荧光,DiO和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考下图。

 

DiO、DiI、DiD、DiR的光谱图

DiO、DiI、DiD、DiR的光谱图

 

DiO, DiI, DiD 和 DiR几种染料的异同:

 

其中I、D、R分别代表了一个,两个,三个双键,它们是决定波长长度的关键,DiO, DiI, DiD 和 DiR这几款染料的结构式如下:

DiR碘化物结构式 Dil高氯酸盐结构式
DiO高氯酸盐结构式 Dil高氯酸盐结构式
DiD高氯酸盐结构式 DiR碘化物结构式
DiD高氯酸盐结构式 DiR碘化物结构式

 

DiO, DiI, DiD 和 DiR几种染料的异同:

名称 荧光颜色 应用 货号
DiO(DiOC18(3)) 绿色荧光 • DiO被广泛用于正向或逆向的,活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂,通常不会明显影响细胞的生存力,对于细胞膜染色的荧光强度通常要低于DiI,有时对于某些经过固定的组织的染色效果欠佳。• 还可以用于检测细胞的融合和粘附,检测发育或移植过程中细胞迁移。 22066
DiI (DiIC18(3)) 橙色荧光 • DiI被广泛用于正向或逆向的,活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂,通常不会影响细胞的生存力。• DiI除了最简单的细胞膜荧光标记外,还可以用于检测细胞的融合和粘附,检测发育或移植过程中细胞迁移,通过FRAP检测脂在细胞膜上的扩散,检测细胞毒性和标记脂蛋白等。 22102
DiD (DiIC18(5)) 红色荧光 • DID染料的染色效率高,均一,不易猝灭,无明显细胞毒性,且受自身荧光背景干扰小。• 目前DID已成功应用于多种细胞的体内示踪研究,如Treg细胞、间充质干细胞、肿瘤细 胞、造血干祖细胞等。 22033
DiR (DiIC18(7)) 深红色荧光 • DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织,在活体成像中用来示踪。常用于标记细胞质膜。两个18-碳链插入到细胞膜,从而特定的、稳定的细胞染色,几乎不会发生细胞间的染料转移。可以用乙醇配置其储存液。• DiR 染色后可进行多聚甲醛(不可使用甲醇等其他试剂)的固定,但不建议在染色后进行透化的过程。 22070

 产品优点:

1. 应用广泛:主要作用是标记细胞膜,用于活的或固定的神经元等细胞或组织的长期示踪剂,同时还可以标记其他疏水结构,例如外泌体

2. 不会影响细胞的生存力

3. 体外培养的条件下可以存活很长时间

4. 在经过固定的神经元细胞膜上的迁移速率为 0.2-0.6mm/day

5. 在活的神经元细胞膜上的的迁移速率为 6mm/day

关于染料的使用技巧:

1.DiI 可以溶解于无水乙醇、DMSO 和 DMF,溶解度约为 1-2.5mg/ml,发现较难溶解时可以适当用超声处理以促进溶解。

2.用于细胞膜荧光标记时,DiI 的常用浓度为 1-25μM,最常用的浓度为 5-10 μM。

3. DiI 可以直接染色活的细胞或组织,染色时间通常为 5-20 分钟。

4. 染固定的细胞时,通常使用 4%多聚甲醛进行固定,使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。

Di家族荧光染料选择小tips:

DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织(请您根据您的需求选择相应的探针),DiI比DiO荧光更亮;DiD,DiR(D12731)波长更长,更适合组织染色;

DiR应用实列赏析:

DiR应用实列 DiR应用实列
DiR应用实列 DiR应用实列
DiR应用实列 DiR应用实列

源文献:Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model Journal: Scientific Reports (2017)

DiD,DiO,DiI,DiR荧光染料之间的区别

DiD染料是一族亲脂性的荧光染料,可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强,这类染料有很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色,染料在整个细胞膜上扩散,zui佳浓度时可以使整个细胞膜染色。

绿色荧光、亲脂性羰花青DiOC18(3)被广泛用作亲脂示踪剂。它在水里是弱荧光的,但当嵌入膜时,它的荧光和光稳定性都很好。

DiI是一种亲脂性膜染料,进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。DiI在进入细胞膜之前荧光非常弱,仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiI被广泛用于正向或逆向的,活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂,通常不会影响细胞的生存力。

DIR是一个亲脂性、近红外荧光花青染料。这个染料常用于标记细胞质膜。两个18-碳链插入到细胞膜,从而特定的、稳定的细胞染色,几乎不会发生细胞间的染料转移。可以用乙醇配置其储存液。细胞染色通常使用的浓度时1-10uM,孵育10-20分钟的。

它们的荧光颜色区分明显:DiI(橙色荧光),DiO(绿色荧光),DiD(红色荧光)和 DiR (深红色荧光)这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的 FITC和TRITC的滤光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激发,有着比DiI更长的激发波长和发射波长,在细胞和组织染色中更有价值。 DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织,在活体成像中用来示踪。

使用方法
1. DiD,DiO,DiI,DiR和DiS细胞膜染色液制备
(1)配置DMSO或EtOH 储存液:储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1~5 mM。
注意:未使用的储存液保存在-20 oC,避免反复冻融。
(2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS或PBS)稀释储存液,配制浓度为1~5 µM的工作液。
注意:工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找佳条件。
2. 悬浮细胞染色
(1)悬浮细胞密度为 1 × 106/mL加入到工作液中。
(2)在37 ℃培养细胞 2~20分钟,不同的细胞佳培养时间不同。
(3)染色细胞试管在1000~1500转离心5分钟。
(4)倾倒上清液,再次缓慢加入预温37℃的培养液。
(5)重复(3),(4)步骤两次以上。
3. 粘壁细胞的染色
(1)使粘壁的细胞在无菌实验室培养。
(2)从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4)在37 ℃培养细胞 2~20分钟,不同的细胞佳培养时间不同。
(5)吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片2~3次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,培养5~10分钟,然后吸干培养基。
4. 显微镜检测
(1)DiD,DiO,DiI,DiR和DiS滤光器的选择参见表1。
(2)多色染料的同时检测,滤光器按照以下设定:
a) DiI和DiO=Omega XF52,Chroma 51004;
b) DiI和DiD=Omega XF92,Chroma 51007;
c) DiI,DiO和DiD=Omega XF93,Chroma 61005
5. 流式细胞仪的检测
DiD,DiO,DiI,DiR和DiS 染色的细胞可以分别用经典的FL1,FL2,FL3和FL4流式细胞仪检测。

储存条件:DiR碘化物-20℃干燥避光保存,有效期一年。

细胞膜荧光探针DiR,碘化物

DiR iodide [1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindotricarbocyanine iodide]

别名:DiR碘化物  
分子量:1013.39
溶剂:DMSO

保存:-20°C干燥避光保存
有效期:12个月

产品描述 细胞膜荧光探针DiR,碘化物产品的光谱学相关参数为Ex=748nm / Em=780nm;其对应分子量大小为1013.39MW.
产品形式 提供的细胞膜荧光探针DiR,碘化物产品为固体形式。我们建议将其溶解到二甲基亚砜(DMSO)溶液中使用或保存。
保存建议 对于 细胞膜荧光探针DiR,碘化物 产品,我们推荐使用常温进行运输.在您收到货物后,我们建议在低于-15℃温度下冷冻保存,要求储存环境干燥并避免光照.产品有效期为12个月.
目录号 产品名称 规格 分子量 Ex/Em
DiD
22033 DiD labeling solution 10ml 959.91 644/663nm
22034 DiD Perchlorate *UltraPure Grade* 25mg 959.91 644/663nm
DiO
22038 DiOC2(3)iodide 100mg 881.7 484/501nm
22039 DiOC3(3)iodide 100mg 488.32 482/497nm
22040 DiOC7(3)iodide 100mg 600.57 482/504nm
22042 DiOC16(3)perchlorate 25mg 825.6 484/501nm
22045 DiOC5(3)iodide 100mg 544.47 482/504nm
22046 DiOC6(3)iodide 100mg 572.52 482/504nm
22066 DiO perchlorate 100mg 881.7 482/501nm
DiI
22035 DiIC12(3)perchlorate 100mg 765.55 549/565nm
22044 DiIC16(3)perchlorate 100mg 877.76 549/565nm
22052 DiIC18(3)-DS 50mg 993.53 555/570nm
22054 DiIC18(5)-DS 50mg 1019.57 650/670nm
22056 DiIC1(5)iodide 100mg 510.45 638/658nm
22101 DiI iodide 100mg 961.32 549/565nm
22102 DiI perchlorate 100mg 933.87 549/565nm
22103 DiI triflate 100mg 983.48 549/565nm
DiR
22070 DiR iodide 10mg 1013.39 748/780nm
DiS
22073 DiSC2(3) 25mg 492.44 560/571nm
22076 DiSC3(5) 100mg 546.53 660/675nm