2×SDS-PAGE双色蛋白Loading buffer(DTT),常用生化试剂

2×SDS-PAGE双色蛋白Loading buffer(DTT)品牌:JinPan | 货号:JP-8152-1ml

2×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液(DTT)使用说明书

【包装规格】

产品编号

产品名称

包装

JP-8152

SDS-PAGE Dual Color Protein Loading Buffer,2×(with DTT)

1ml/10ml/100ml

 

使用说明书

1

【保存条件】

建议分装冻存,避免反复冻融,-20℃,有效期1

【概述】

SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液可保护蛋白质在样品制备步骤中免受热降解,并在SDS-PAGE运行期间防止pH值变化。一些蛋白质对在Tris缓冲液中电泳期间温度波动引起的pH变化敏感,优化后的上样缓冲液组分可防止在SDS-PAGE电泳之前的样品加热过程中以及电泳过程中蛋白质降解。SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。

上样缓冲液包含两种跟踪染料:蓝色(溴酚蓝),用于跟踪电泳的进度;粉红色(pyronin Y),用于在Western印迹过程中监测蛋白质向膜的转移。

【使用建议】

1. 室温解冻2×SDS-PAGE双色蛋白上样缓冲液。

2. 请按每10μl蛋白样品加入10μl上样缓冲液的比例(两倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高,可用双蒸水稀释。

3. 混匀后,100℃水浴加热5-10分钟,使蛋白变性。

4. 冷却至室温后,10000-14000rpm离心2-5分钟,取上清直接上样电泳即可。

【注意事项】

1.     DTT对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

2.     为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

3.     聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%时溴酚蓝指示条带的位置大概在30kd左右, 胶浓度为12%时,约在20kd左右,胶浓度为15%时,大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。

4.     蛋白上样缓冲液含有溴酚蓝、吡罗红指示剂,PH值受保存温度影响,在低温冻存状态下,溶液可能会呈现深棕色,不影响产品使用。

5.     一般而言,吡罗红的迁移速度快于溴酚蓝。在较高百分比的SDS聚丙烯酰胺凝胶(例如15%)中,吡罗红染料的迁移速度比溴酚蓝慢。

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