细菌基因组DNA提取试剂盒50T,常用生化试剂

细菌基因组DNA提取试剂盒50T品牌:JinPan | 货号:EK-1208-50T 操作步骤:
1. 取200μl细菌菌液(最多不超过1×109cells)于无酶1.5ml离心管中。
2. 10000×g离心1min或3000×g离心5min收集细菌沉淀。
3. 加入200μl无菌PBS将细菌重悬。
注意:为尽可能减少LB等细菌培养基对提取过程中的影响,可重复步骤2-3一次。
4. 加入30μlLysozyme Solution至溶液中,充分涡旋混匀15-20s后37℃孵育15-30min。
5. (可选)加入5μl RNaseASolution(20mg/ml,自备)至消化液中,颠倒混匀,室温或37℃放置5-10min。
6. 将所得溶液加入200μl Buffer BB并充分混匀,加入20μl ProteinaseK Solution后立即混匀,彻底混匀后置于70℃水浴中孵育10min。
7. 将溶液从水浴中取出,并加入100μl异丙醇充分混匀。
8. 于13000×g离心5min,离心结束后取上清溶液加入核酸吸附柱(提前套在2ml收集管中)。
9. 以8000×g离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
10. 向吸附柱中加入500μl Buffer IRB,8000×g离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
11. 向吸附柱中加入500μl Buffer WB(已加入无水乙醇),8000×g离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
12. 重复操作步骤11一次。
13. 倒掉收集管中的废液后将吸附柱再次套入收集管中,最大转速 (~13,400×g)离心2min以除尽Buffer WB。将吸附柱套入新的1.5ml无酶离心管中并置于室温放置5-10min彻底晾干乙醇。
注意:Buffer WB中的乙醇残留会影响后续的酶反应实验。
14. 向吸附柱膜中间位置悬空滴加50-100μl BufferEB,室温静置2min后,最大转速(~13,400×g)离心2min收集核酸溶液。丢弃柱子,盖上EP管盖子置于-20℃保存。
注意:洗脱体积不应小于30μl,体积过少会影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。为了提高DNA的回收量,可将BufferEB加热(约60℃)并洗脱两次,可增加约15-20%得率。

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