NewZOL LS 总RNA提取试剂(NewZOL LS Reagent)品牌：JinPan | 货号：EK-5303-500ml
功能与使用方法与life品牌的Trizol LS相似
【保存条件】
2-8℃长期保存
【操作方法】
I. 样本处理
1. 组织样本处理：用匀浆器或其他类似设备匀化组织样本机械破坏装置，每 500μL 最多使用 50 mg 组织NewZOL LS。 对于 DNA 含量高的组织（例如脾脏），建议使用 25 mg 组织/ 500μL 试剂。
2. 贴壁细胞样本处理：除去细胞培养基，通过向培养皿（直径 3.5 cm，10 cm2）中加入至少 1 mL NewZOLLS 并通过反复吸移来确保完全裂解。（根据培养皿面积而不是细胞数计算试剂量。试剂量不足将导致分离的 RNA 受到 DNA 污染。残留的匀浆可以在-20 至-80°C 下保存至少一年，以备后用。）
3. 悬浮细胞样本处理：沉淀细胞，并通过添加 NewZOL LS 直接裂解。 每 5×106个细胞至少加入 500μLNewZOL LS，移液器吹打数次裂解细胞。（添加 NewZOL LS 之前请勿洗涤细胞，细胞洗涤可能会导致 RNA降解。）
4. 液体样本处理：每 200μL 液体样品中加入 500μL NewZOL LS 进行均质化和裂解。对于小于 200μL 的样品体积，请添加 500μLNewZOL LS 并加水至最终体积为 700μL。
5. 富含脂质样本处理：如上所述均质化富含脂质的样品。将样品以 12,000×g 离心 5 分钟。 离心后，样品顶部会出现一层脂肪。用移液器吸头尖端刺穿上层，然后将上清液转移到新管中。
II. RNA 提取
1. 每使用 500μLNewZOL LS 的裂解液中加入 200μL 无 RNase 的水至裂解液中。剧烈摇动样品 15 秒钟。在室温下孵育 5 分钟。（对于包含 50 mg 组织/ 500μL NewZOL LS 的样品，建议在室温下孵育 15 分钟。）
2. 在室温下以12,000×g离心样品15分钟。含有DNA，蛋白质和多糖的半固体沉淀物形成在试管底部。RNA仍溶解在上清液中。
3. 将 500μL 上清液转移至新管中。 勿吸太干净防止污染，在 DNA /蛋白质沉淀上方保留一小部分上清液。
（含有 DNA，蛋白质和多糖的沉淀物占匀浆-水混合物总量的约 10％。）
4. 加入等体积异丙醇，上下颠倒混匀以沉淀 RNA，在室温下孵育样品 10 分钟。
5. 将样品以 12,000×g 离心 10 分钟，除去并丢弃上清液。通常，在管的底部以白色沉淀的形式获得 RNA。对于脾脏样品，RNA 在试管底部形成凝胶状膜。用乙醇洗涤后，膜变得更可见。
6. 加入 500μL 75％ 乙醇（无 RNase 水配制）洗涤，轻弹管底使沉淀悬浮，上下颠倒混匀。对于较大的试管，按比例添加 75% 乙醇溶液。
7. 将沉淀以 8,000×g 的速度离心 3 分钟。移液去除沉淀中的乙醇，重复乙醇洗涤步骤一次。静置 5-10 分钟待乙醇挥发，无需过份干燥成固体，干燥成固体的 RNA 沉淀不易溶解
8. 将 RNA 沉淀溶于无 RNase 的水中，在室温下涡旋 3 分钟，以实现有效溶解。将得到的 RNA 进行检测或-65℃长期保存（若需更长时间保存请添加适量 RNA Chill（JP-8520））。
【注意事项】
1. RNA 酶污染注意事项：
a. 提取过程用品均经过去 RNA 酶处理：玻璃制品可以 150 °C 烘烤 4 小时 ，塑料制品可浸泡于 0.5M NaOH 溶液后用清水冲洗并高压灭菌，吸头及离心管类尽量使用一次性无酶吸头及离心管
b. 佩戴手套及口罩及护目镜：皮肤上常含有细菌和霉菌，可污染 RNA 制备，且同时是 RNA 酶来源，同时 New ZOL LS 对皮肤有一定毒性，建议佩戴手套及口罩及护目镜。
c. 尽量于通风橱内提取：避免吸入提取过程中有毒物质。
2. 安全性问题：
a. 本品在与皮肤接触及吞咽有毒性，可导致烧伤。与皮肤接触后，应立即用洗涤剂和大量水冲洗。
如感到身体不适，应立即就医
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