双通道非洲猪瘟病毒荧光定量 PCR 检测试剂盒品牌：JinPan | 货号：EK-9021-50T
African Swine Fever Virus Real-time PCR Detection Kit
【贮藏与有效期】
-20℃以下保存，有效期为 12 个月。
【主要成分与含量】
【用法与判定】
1. 核酸提取步骤：取拭子或血样10μl 加入裂解液 10μl 充分混匀后于室温或 56℃处理10min后再 95℃加热 5min。取 5μl 上清用于下游检测扩增。为获取更优结果，可考虑使用柱法或磁珠法提取试剂盒提取核酸。
2. PCR 操作步骤
2.1 取出试剂盒，将试剂盒置室温（冰上溶解更优）各试剂完全溶解并混匀。
2.2 取需要数量的 PCR 管，取 20μl PCR 反应液至每个反应管内，然后加 5μl 所提取的样品核酸，每个反应总体积为 25μl。每次检测应设立阳性对照和阴性对照，在荧光定量 PCR仪上进行扩增检测。
2.3 将各 PCR 管放置在仪器槽的相应位置，并记录放置顺序，按下表设置仪器核酸扩增相关参数，进行 PCR 扩增。
3.结果判定
3.1 阴性对照：1） FAM 与 VIC 通道均应无扩增曲线，偶有翘尾（Ct≥38）属于正常；
3.2 阳性对照：
1）FAM 通道应有扩增曲线，且其 Ct 值<33；FAM 通道 Ct 值≥33 时，检测试剂或者阳性参考品可能存在问题，应重新实验，此时若样本孔根据判读标准为阳性，结果为阳性；
2）VIC 通道应有扩增曲线且其 Ct 值<32；VIC 通道 Ct 值≥32 时，检测试剂或者阳性参考品存在问题，应重新实验，此时若样本孔根据判读标准为阳性，结果为阳性；
3.3 样本：
1）VIC 通道 Ct 值>36：如 FAM 通到 Ct 值≤38，则结果为阳性；如 FAM 通到 Ct>38 或者没有扩增曲线，则样本投入量过少或者存在 PCR 抑制剂，建议重新取样；
2）VIC 通道 Ct 值≤36：如 FAM 通到 Ct 值≤38，则结果为阳性；如 FAM 通到 Ct>38 或者没有扩增曲线，则结果为阴性。若被检样品 FAM 通道 38
*注：VIC 通道为猪内参信号，FAM 为非瘟病毒信号。阳性结果应该是明细扩增曲线，如果应该增幅低且扩增曲线不明显，应为非特异性扩增。
【注意事项】
（1）严格按照使用说明书进行操作。使用前应将各试剂完全溶化，充分振荡混匀，瞬时离心
应尽量吸取液体上层。
（2）试剂盒不同组分间不得交叉，防止污染。
（3）避免反复冻融。
（4）PCR 产物均应合理处理，以免造成污染。
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