Wako 292-81101生物制药残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)

Wako 292-81101生物制药残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)

生物制药残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)残留DNA提取试剂盒遵照中国药典记载的碘化钠法,适用于疫苗和治疗用生物制品所含宿主细胞残余DNA的提取。

残留DNA提取试剂盒可以提取样品中含有的极微量的DNA,回收率较高。DNA的提取操作时间为60-90 min。提取的DNA可以通过qPCR进行定量。

◆特点
● 遵照中国药典登载的碘化钠法*1

● 高回收率

● 单管操作(无需换管) ,耗时仅60-90 min

● 不需要苯酚和氯仿等有机溶剂

● 兼容多种DNA

*1 为使DNA检测方法与国际标准保持同步,中国药典(The Chinese Pharmacopoeia)宣布建立残留细胞DNA检测国家标准。碘化钠法将作为残留DNA提取方法,被新增至2020版的中国药典中。

◆原理

1. 使样品中的蛋白质和脂质溶于碘化钠和N-月桂基肌氨酸钠;

2. 异丙醇与糖原选择性地共沉淀DNA。

◆使用方法

方法1

方法2

◆应用实例

DNA spiking test(加标回收实验)

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■ 实验方案
方案1:血清中DNA 提取操作步骤
试剂准备:
1) DNA 提取之前,试剂提取如下:
26 ml 碘化钠溶液加入6 ml 蒸馏去离子水稀释,
再加入1 ml 月桂酰肌氨酸钠和65 μl 糖原溶液并混合均匀。
2) 向洗涤溶液(B)加入2 μl 糖原溶液并立即混合均匀。
注意事项:
1) 用于稀释Nal 溶液的蒸馏去离子水须去除DNA。
2) 配制好的洗涤溶液(B)在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗涤溶液(B),加入糖原溶液到无菌离心管中至合适体积即可。
3) 在保存期间Nal 溶液会结晶,加热溶液至50℃可帮助溶解。
DNA 提取步骤:
1) 吸取100 μl 的血清样品加入1.5 ml 微量离心管;
2) 再加入300 μl 配制好的Nal 溶液至离心管并混合均匀;
3) 将离心管在60℃恒温容器中加热15 分钟;
4) 取出离心管,加入400 μl 异丙醇至离心管并混合均匀;
5) 离心管在室温静置15 分钟后离心10,000 g 15 分钟;
6) 尽可能多地吸取上清液,将离心管倒置在纸面上除去残留溶液;
7) 加入1 ml 配制好的洗涤溶液(B)重悬浮得到的白色沉淀,并使白色沉淀从离心管壁上弹开;
8) 短暂离心10,000 g 5 min,去除上清液,将剩余沉淀真空干燥,用于后续的DNA 分析。
 
方案2: Threshold* 系统DNA定量法的预处理
试剂预处理:
1) 将65 μl 糖原溶液加入26 ml 碘化钠溶液;
2) 将2 μl 糖原溶液加入40 ml 洗涤溶液(B),立即混合均匀。
注意事项:
1) 用于稀释碘化钠溶液的蒸馏去离子水须去除DNA。
2) 配制好的洗涤溶液(B)在4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗涤溶液(B),加入糖原 溶液到无菌离心管中至合适体积即可。
3) 在保存期间碘化钠溶液会结晶,加热溶液至50℃可帮助溶解。
4) 提取步骤应在DNA 变性之前,因此重要的是使用无菌技术尽可能降低DNA 污染。预先包装好的无菌吸管、无菌试管和手套都要经过此步骤。
DNA 提取步骤:
1) 吸取400 μl 或500 μl 的样品加入2 ml 无菌带盖微量离心管并混合均匀;
2) 吸取20 μl 的月桂酰肌氨酸钠溶液加入微量离心管并混合均匀;
3) 再加入500 μl 包含糖原的碘化钠溶液至混合溶液,涡旋后在40℃保温15 分钟;
4) 加入900 μl 异丙醇至混合溶液,涡旋后静置于室温15 分钟;
5) 短暂离心10,000 g 15 min 后,能看见管壁有白色沉淀,吸取上清液后将离心管倒置于纸面去除残留溶液;
6) 加入800 μl 洗涤溶液(A)至离心管,剧烈涡旋使白色沉淀从离心管壁上弹开;
7) 短暂离心10,000 g 5 min 后,去除残留溶液;
8) 加入1500 μl 包含糖原的洗涤溶液(B)至离心管并涡旋,短暂离心10,000 g 5 min 后吸取上清液,剩余的白色沉淀包括DNA 和糖原载体;
9) 加入分析用缓冲液(Zero Calibrator buffer) 使白色沉淀溶解,用于后续的DNA 分析。

DNA Extractor™ Kit可以高产量提取残留DNA,甚至少量残留DNA。

■ 试剂
1.试剂盒组分:
1)碘化钠溶液  1 x 26 ml
2)月桂酰肌氨酸钠  1 x 1.2 ml
3)洗涤溶液(A)  1 x 42 ml
4)洗涤溶液(B)  2 x 40 ml
5)糖原溶液  1 x 0.1 ml
2.必需的试剂和仪器:
试剂:
1)异丙醇(特级) 40 ml
2)蒸馏去离子水 6 ml
仪器:
1)微型离心机(Max. 12,000 g)
2)有盖微量离心管(1.5 or 2 ml)
3)旋涡混合器
■ 保存
2 – 10℃,试剂盒的保存期为2 – 3 年。

◆试剂盒构成

产品编号 内容物 内容量
299-81111 碘化钠溶液, CP 26 mL
296-81121 N-月桂酰肌氨酸钠溶液, CP 1.2 mL
293-81131 洗净液A, CP 42 mL
290-81141 洗净液B, CP 40 mL
297-81151 糖原溶液, CP 0.1 mL

备注:每种成分不单独出售

◆产品列表

产品编号 产品名称 包装
292-81101 残留DNA提取试剂盒(碘化钠法)
DNA Extractor™ Kit for Residual DNA, CP Method (Sodium Iodide Method)
50 tests
温馨提示:不可用于临床治疗。

 

Wako DNA Extractor®提取试剂盒产品选择
样本 全血 血清 血浆 组织 石蜡包埋组织切片 生物制药 培养细胞 头发、指甲、血迹、唾液
基因组DNA DNA Extractor ® WB Kit
DNA Extractor ® WB-Rapid Kit
    DNA Extractor ® WB Kit DNA Extractor ® SP kit
DNA Isolator PS-Rapid Reagent
  DNA Extractor ® WB Kit DNA Extractor ® FM kit
线粒体DNA(mt DNA) mtDNA
Extractor ® WB Kit
    mtDNA Extractor® WB Kit     mtDNA
Extractor ® CT Kit
 
游离DNA   DNA Extractor ® SP kit DNA Extractor ® SP kit          
低氧化程度的DNA DNA Extractor ® WB Kit     DNA Extractor ® TIS kit     DNA Extractor ® TIS kit  
细菌基因组DNA   DNA Extractor ® kit       DNA Extractor ® kit    
病毒DNA   DNA Extractor ® kit            

 

DNA Extractor® 系列产品列表
产品编号 产品名称 规格 样品类型 原理 特点 试剂盒组成
生物制品中的残余DNA提取
295-50201 DNA Extractore® Kit Wako
生物制药残余DNA抽提试剂盒
50次 生物制药
血清
碘化钠法 生物制品中的残余DNA提取 碘化钠溶液
月桂酰肌氨酸钠溶液
洗涤液(A)
洗涤液(B)
糖原溶液
26ml×1
1.2mL×1
42mL×1
40mL×2
0.1mL×1
血清和血浆中的DNA提取
296-60501 DNA Extractor® SP Kit
血清血浆中DNA抽提试剂盒
50次 血清和
血浆
碘化钠法 1、高灵敏度仅需100 μL血清或血浆样品,高DNA产量;
2、整个提取过程在单独的离心管中,无交叉污染;
3、特别配制的乙醇能完全去除血液中的脂质
酶反应液
蛋白质消化液
碘化钠溶液
乙醇溶液
洗涤液(A)
洗涤液(B)
10ml×1
25μL×1
15mL×1
30mL×1
50mL×1
50mL×1
人和动物组织中的DNA提取(用于8-羟基脱氧鸟苷检测)
296-67701 DNA Extractor® TIS Kit
人和动物薄壁组织中尿8-羟基脱氧鸟苷DNA抽提试剂盒
50次 组织培养
细胞
碘化钠法 1、用于8-羟基脱氧鸟苷(氧化应激标志物)检测和鉴定;
2、抗氧化剂阻止更进一步的DNA氧化
裂解液
酶反应液
蛋白酶溶液
蛋白消化液
氧化抑制剂
碘化钠溶液
乙醇溶液
PEG溶液
75mL×2
15ml×1
50μL×1
750μL×1
350μL×1
15mL×1
30mL×1
20mL×1
全血中的DNA提取
291-50502 DNA Extractor® WB Kit
全血DNA抽提试剂盒
50次 全血
组织
培养细胞
碘化钠法 1、高DNA回收率;
2、整个提取过程在单独的离心管中,无交叉污染
裂解液
酶反应液
碘化钠溶液
洗涤液(A)
洗涤液(B)
蛋白酶
65ml×2
10mL×1
15mL×1
50mL×1
50mL×1
10mg×1
297-54801
293-54803
DNA Extractor® WB-Rapid Kit
全血DNA抽提试剂盒
20次
200次
全血   比DNA Extractor® WB Kit实验步骤更少、提取时间更短(30分钟以内)。 裂解液
酶反应液
洗涤液
蛋白酶溶液
20次反应
10mL×1
0.8mL×1
20mL×1
40μL×1
200次反应
50mL×1
8mL×1
70mL×3
400μL×1
石蜡包埋组织的DNA提取
295-52401 DNA Isolator PS Kit
石蜡包埋组织DNA抽提试剂盒
100次 石蜡包埋
组织
    酶反应液
酶激活剂
蛋白酶
DNA沉淀促进剂
DNA稀释剂
2ml×1
34mg×1
2.2mg×1
0.5mL×1
0.5mL×1
291-56401 DNA Isolator PS-Rapid Reagent
石蜡包埋组织DNA抽提试剂盒
100次 石蜡包埋
组织
煮沸法   DNA提取溶液 10mL×5
全血中线粒体DNA提取
293-54401 mtDNA Extractor® WB Kit
全血中线粒体DNA抽提试剂盒
25次 全血 碘化钠法 全血中线粒体 DNA提取可在90分钟内完成 白血球提取溶液
DNA提取溶液|
DNA提取溶液||(A)
DNA提取溶液||(B)
DNA提取溶液|||
碘化钠溶液
洗涤液
5.0ml×1
26.5ml×1
1.3ml×1
1.3ml×1
1.9mL×1
7.5mL×1
50mL×1
培养细胞和组织样品中的线粒体DNA提取
291-55301 mtDNA Extractor® CT Kit 25次 组织
培养细胞
碘化钠法 培养细胞和组织样品中的线粒体
DNA提取
匀浆液援冲液
DNA提取溶液|
DNA提取溶液||(A)
DNA提取溶液||(B)
DNA提取溶液|||
碘化钠溶液
洗涤液
25.0ml×1
1.3ml×1
1.3ml×1
1.3ml×1
1.9mL×1
7.5mL×1
50mL×1
法医学调查的DNA提取
295-58501 DNA Extractor® FM Kit
法医学研究DNA抽提试剂盒
50次 头发
指甲
血迹
唾液
碘化钠法 在几十分钟内可溶解多种毛发 裂解液
酶激活试剂(EAR)
再水化液
蛋白酶
碘化钠溶液
洗涤液(A)
洗涤液(B)
9.5ml×1
80mg×1
0.5ml×1
10mg×1
12.5mL×1
50mL×1
50mL×1
上述试剂仅供实验研究用,不可用作“医药品”、“食品”、“临床诊断”等。