EZ poly™DT转染试剂(NBS2022)

EZ polyDT转染试剂

 

产品编号

产品名称

包装规格

NBS2022-0.5ml

EZ polyDT转染试剂

0.5ml

NBS2022-1ml

EZ polyDT转染试剂

1ml

NBS2022-5ml

EZ polyDT转染试剂

5x1ml

 

产品简介:

EZ polyDT转染试剂是一款适用于难转细胞的DNA专用转染试剂,可用于质粒DNA的高效传送。它具有极强的DNA转染能力,与其它转染试剂相比,具有转染效率高、不受血清影响、毒性低、稳定性好、转染简单易行、重复性好等优点。

 

应用范围:

EZ polyDT转染试剂可适用于众多难转染细胞株的 DNA转染、瞬时转染及稳定转染。适用于多种贴壁细胞系,特别适用于各种难转细胞如BMDC4T1CT26DC2.4等难转染细胞,均可得到较高的转染效率,且重复性好。

 

保存条件

2-8℃保存一年

 

运输

常温运输

 

 

 

质粒DNA的转染:

24孔板为例,请参考1的转染规模调整,步骤如下:

1

细胞接种: 每孔接种0.5~1.0×105个细胞,细胞培养12~24小时,使转染时细胞密度达到60~70%融合度

2

DNA稀释:将质粒DNA稀释于Opti-MEM培养基中,终浓度0.1mg/ml

3

复合物制备: 1µLEZ polyDT转染试剂加入到9µL Opti-MEM培养基中,取4µL浓度为0.1mg/ml的质粒DNA加入6µL Opti-MEM培养基中,两者等体积混合

4

室温静置10分钟

5

每孔20 µL复合物加入细胞培养板中,混匀,37℃培养18~48小时后检测基因表达,无需更换培养基

 质粒DNA的转染优化:

可通过改变细胞密度、DNA浓度以及EZ polyDT转染试剂浓度对转染进行优化。保证细胞融合度在60%以上,EZ polyDT转染试剂(µL):DNA (µg)可以在2:15:1之间调整。

1. 不同培养板所需转染试剂和DNA的用量

 

培养板

单孔面积

接种

培养基

Opti-MEM

稀释后终体积

DNA转染

试剂用量

DNA

96孔板

0.3cm2

200µL

10µL

0.5µL

0.2µg

24孔板

2.0cm2

500µL

20µL

1.0µL

0.4µg

12孔板

4.0cm2

1mL

40µL

2.5µL

1.0µg

6孔板

10.0cm2

2mL

100µL

5.0µL

2.0µg

60mm

20.0cm2

5mL

0.2mL

10µL

4.0µg

100mm

60.0cm2

15mL

0.6mL

30µL

12.0µg

EZ poly™DT转染试剂(NBS2022)

一:转染效率低

影响细胞转染效率的因素有很多。首先,与所转染细胞有关,有的细胞容易转染,如HeLa、B16F10、293T等。有的细胞不易转染,如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次,与转染试剂的用量及与DNA的比例有关,在最佳的转染比例附近可以达到最佳的转染效果。最后,没有使用最适宜的细胞密度,应根据各种转染试剂的说明书中推荐的细胞密度进行细胞接种,更有利于提高转染效率。


二:转染效果不稳定,不能重现

转染效果不稳定一般与两个因素紧密相关,一个是转染试剂的稳定性,另一个是基因的稳定性。转染试剂应按照说明书建议的保存温度及条件进行保存。如使用脂质体类的转染试剂,则不建议反复冻融,会引起该转染试剂结构上的变化。基因如短时间内连续使用,可放置于4℃保存。若超过10天不使用,建议置于-20℃或-80℃长期储存以降低核酸的降解速度。


三:细胞毒性大

导致转染时细胞毒性大的因素有很多,例如DNA的用量过大、转染试剂的用量过大、转染时细胞状态较差以及培养基中抗生素的加入等。建议严格按照所选择转染试剂的说明书进行操作,以避免细胞毒性大的问题。

四:没有生成高效率的DNA转染试剂复合物

没有生成高效复合物的因素有很多。首先,可能是没有选对合适的转染试剂。挑选转染试剂时应考虑基因的种类及分子量等因素。其次,有的转染试剂对血清的影响很大,应在无血清情况下进行转染。使用诺宁生物的EZ poly™  系列转染试剂无需考虑血清对转染体系的影响,可在含血清培养基中进行转染。

五:使用错误的转染操作步骤

无论使用哪一款基因转染试剂,都应严格按照该转染试剂的说明书进行操作,其中包括转染试剂的用量、基因用量、最佳转染比例、孵育时间、检测时间等重要因素。

六:转染试剂有时呈云雾状浑浊

如发现转染试剂出现云雾状浑浊应立即联系客服人员。基因转染试剂一般都呈清澈透明状态,呈云雾状浑浊可能是由于转染试剂发生了污染或储存温度太低,请务必按照试剂说明书要求的温度进行储存。如出现此现象,建议温浴10分钟后,观察是否澄清。


七:转染复合物出现沉淀

当转染试剂和基因的用量都高于说明书用量,或复合物的孵育体系体积小于说明书建议时,由于体系中过量的电荷发生了聚集会导致体系中的复合物出现沉淀。建议要严格参考说明书的用量进行转染。


八:siRNA转染时,基因沉默效率不够高

影响siRNA沉默效率的因素很多,如基因本身是否被环境中的RNA酶污染降解?或所使用的细胞是否为难转染细胞?以及是否按照说明书建议的用量进行了操作等。首先应该选择合适的siRNA基因转染试剂,确保细胞密度在60-70%之间,并严格按照说明书建议的用量去使用操作。


九:DNA-siRNA共转染时,基因沉默效率不够高

当细胞同时转染DNA和siRNA时,建议使用分别转染的方式进行。即使用基因转染试剂分别与DNA和siRNA进行复合,再将两个复合物体系分两次分别加入到同一个装有细胞的实验孔中。因DNA和RNA的转染机理不相同,如只想使用一种转染试剂同时转染两种基因,建议一定要使用通用型基因转染试剂,如EZ poly™ 系列的DNA/RNA产品,即可以转染DNA又可以转染RNA。