Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对

产品编号

JP07043S
Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对
各1μg

1776

JP07043M
Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对
各100μg

2338

自行研发生产的Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对(Positive Control Plasmids Pair for Flag&HA Co-IP)包含pCMV-3X Flag-LTA和pCMV-HA-JP5两种质粒,可以用于在哺乳动物细胞中表达N端带有3X Flag标签的人源LTA和HA标签的JP5融合蛋白。因为JP5和LTA蛋白间具有较强的相互作用,本质粒对可作为共转染细胞免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)的阳性对照使用,也可以单独转染细胞作为免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)的阳性对照使用。
免疫沉淀或免疫共沉淀是研究蛋白或蛋白与蛋白相互作用(Protein-Protein Interactions, PPIs)的常用实验技术,通过使用特异性抗体和可结合抗体的介质(如Protein A/G Agarose或Protein A/G磁珠),或直接使用偶联特异性抗体的介质(如琼脂糖凝胶或磁珠),然后通过离心或磁力从溶液中分离出抗原和抗体复合物,从而将目标蛋白质从复杂样品中分离出来,随后可以用于Western印迹检测或质谱分析等[1-2]。
pCMV-3X Flag-LTA质粒表达LTA。LTA即SV40大T抗原(SV40 large T antigen),也称SV40gp6 large T antigen (Macaca mulatta polyomavirus 1),全长708氨基酸,分子量为81.6kDa,是一种六聚体蛋白。当LTA单独表达时能诱导静止细胞的增殖和转化,可以诱导实验动物肿瘤的形成,为研究DNA复制和细胞转化提供了非常有用的模型[3]。
pCMV-HA-JP5质粒表达JP5。JP5中文名为细胞肿瘤抗原JP5 (Cellular tumor antigen JP5),全长393氨基酸,理论分子量为43.7kDa,实际分子量约为53kDa,是调控细胞周期的重要转录因子,主要功能包括调节细胞周期、促进细胞凋亡、维持基因组稳定性和抑制肿瘤血管生成等,野生型的JP5是一个重要的抑癌基因[4]。
本质粒对均含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达,均带有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性和新霉素(Neomycin)抗性。
本质粒对用于磁珠法免疫共沉淀的效果参考图1A,用于琼脂糖凝胶法免疫共沉淀的效果参考图1B。

图1. 的Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对(JP07043)用于免疫共沉淀的效果图。图A使用了Flag标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法) (JP2081)和HA标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法) (JP2085),图B使用了Flag标签蛋白免疫沉淀试剂盒(琼脂糖凝胶法) (JP2002)和HA标签蛋白免疫沉淀试剂盒(琼脂糖凝胶法) (JP2006)。293T细胞(人胚肾细胞)单独或共转染pCMV-3X Flag-LTA和pCMV-HA-JP5质粒36小时后,使用Western及IP细胞裂解液(JP010013)裂解。泳道1为小鼠IgG磁珠或琼脂糖凝胶免疫沉淀后洗脱的样品,为免疫共沉淀的阴性对照;泳道2、3和4为磁珠或琼脂糖凝胶免疫沉淀后洗脱的样品,其中图A是经3X Flag Peptide或HA Peptide洗脱后的样品,图B是经SDS-PAGE Sample Loading Buffer洗脱后的样品,从泳道4可观察到共转染的Flag-LTA与HA-JP5可以相互作用。Input即全细胞裂解液(Total cell lysate)。Western印迹成像由BeyoImager? 600化学发光成像系统完成(EI600)。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
推荐使用的测序引物序列如下:
CMV-F primer: 5′ -CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3′
BGH-R primer: 5′-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3′
pCMV-3X Flag-LTA和pCMV-HA-JP5的全序列信息:JP07043-1 pCMV-3X Flag-LTA全序列.txt;JP07043-2 pCMV-HA-JP5全序列.txt。
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JP07043S-1
pCMV-3X Flag-LTA
1μg

JP07043S-2
pCMV-HA-JP5
1μg


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JP07043M-1
pCMV-3X Flag-LTA
100μg

JP07043M-2
pCMV-HA-JP5
100μg


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1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本质粒对仅经过测序、免疫沉淀和免疫共沉淀验证,未经过功能性验证。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

Flag&Myc Co-IP阳性对照质粒对

产品编号

JP07041S
Flag&Myc Co-IP阳性对照质粒对
各1μg

1776

JP07041M
Flag&Myc Co-IP阳性对照质粒对
各100μg

2338

自行研发生产的Flag&Myc Co-IP阳性对照质粒对(Positive Control Plasmids Pair for Flag&Myc Co-IP)包含pCMV-3X Flag-JP5和pCMV-Myc-LTA两种质粒,可以用于在哺乳动物细胞中表达N端带有3X Flag标签的人源JP5和Myc标签的LTA (large T antigen)融合蛋白。因为JP5和LTA蛋白间具有较强的相互作用,本质粒对可作为共转染细胞免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)的阳性对照使用,也可以单独转染细胞作为免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)的阳性对照使用。
免疫沉淀或免疫共沉淀是研究蛋白或蛋白与蛋白相互作用(Protein-Protein Interactions, PPIs)的常用实验技术,通过使用特异性抗体和可结合抗体的介质(如Protein A/G Agarose或Protein A/G磁珠),或直接使用偶联特异性抗体的介质(如琼脂糖凝胶或磁珠),然后通过离心或磁力从溶液中分离出抗原和抗体复合物,从而将目标蛋白质从复杂样品中分离出来,随后可以用于Western印迹检测或质谱分析等[1-2]。
pCMV-3X Flag-JP5质粒表达JP5。JP5中文名为细胞肿瘤抗原JP5 (Cellular tumor antigen JP5),全长393氨基酸,理论分子量为43.7kDa,实际分子量约为53kDa,是调控细胞周期的重要转录因子,主要功能包括调节细胞周期、促进细胞凋亡、维持基因组稳定性和抑制肿瘤血管生成等,野生型的JP5是一个重要的抑癌基因[3]。
pCMV-Myc-LTA质粒表达LTA。LTA即SV40大T抗原(SV40 large T antigen),也称SV40gp6 large T antigen (Macaca mulatta polyomavirus 1),全长708氨基酸,分子量为81.6kDa,是一种六聚体蛋白。当LTA单独表达时能诱导静止细胞的增殖和转化,可以诱导实验动物肿瘤的形成,为研究DNA复制和细胞转化提供了非常有用的模型[4]。
本质粒对均含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达,均带有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性和新霉素(Neomycin)抗性。
本质粒对用于磁珠法免疫共沉淀的效果参考图1A,用于琼脂糖凝胶法免疫共沉淀的效果参考图1B。

图1. 的Flag&Myc Co-IP阳性对照质粒对(JP07041)用于免疫共沉淀的效果图。图A使用了Flag标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法) (JP2081)和Myc标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法) (JP2083),图B使用了Flag标签蛋白免疫沉淀试剂盒(琼脂糖凝胶法) (JP2002)和Myc标签蛋白免疫沉淀试剂盒(琼脂糖凝胶法) (JP2004)。293T细胞(人胚肾细胞)单独或共转染pCMV-3X Flag-JP5和pCMV-Myc-LTA质粒36小时后,使用Western及IP细胞裂解液(JP010013)裂解,并使用相应的标签蛋白免疫沉淀试剂盒进行免疫沉淀。泳道1为小鼠IgG磁珠或琼脂糖凝胶免疫沉淀后洗脱的样品,为免疫共沉淀的阴性对照;泳道2、3和4为磁珠或琼脂糖凝胶免疫沉淀后洗脱的样品,其中图A是经3X Flag Peptide或c-Myc Peptide洗脱后的样品,图B是经SDS-PAGE Sample Loading Buffer洗脱后的样品,从泳道4可观察到共转染的Flag-JP5与Myc-LTA可以相互作用。Input即全细胞裂解液(Total cell lysate)。Western印迹成像由BeyoImager? 600化学发光成像系统完成(EI600)。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
推荐使用的测序引物序列如下:
CMV-F primer: 5′ -CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3′
BGH-R primer: 5′-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3′
pCMV-3X Flag-JP5和pCMV-Myc-LTA的全序列信息:JP07041-1 pCMV-3X Flag-JP5-全长序列.txt;JP07041-2 pCMV-Myc-LTA-全序列.txt。
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JP07041S-1
pCMV-3X Flag-JP5
1μg

JP07041S-2
pCMV-Myc-LTA
1μg


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JP07041M-1
pCMV-3X Flag-JP5
100μg

JP07041M-2
pCMV-Myc-LTA
100μg


说明书
1份

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-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本质粒对仅经过测序、免疫沉淀和免疫共沉淀验证,未经过功能性验证。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

pCMV-3X Flag-JP5是自行研发生产的在哺乳动物细胞中表达3X Flag标签的人源JP5(1-393aa)融合蛋白的质粒

JP07031-1μg
pCMV-3X Flag-JP5
1μg

JP07031-100μg
pCMV-3X Flag-JP5
100μg

pCMV-3X Flag-JP5是自行研发生产的在哺乳动物细胞中表达3X Flag标签的人源JP5(1-393aa)融合蛋白的质粒,可以方便使用抗Flag标签的抗体来识别JP5蛋白的表达,或进行免疫共沉淀(Co-IP)分析等。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;带有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性和新霉素(Neomycin)抗性,可利用其氨苄青霉素抗性转化大肠杆菌后筛选阳性菌,而在转染哺乳动物细胞后,可使用G418 (JJP010081/JJP010081)筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。G418和新霉素效果一致,但G418的细胞毒性更低。
JP5中文名为细胞肿瘤抗原JP5 (Cellular tumor antigen JP5),是调控细胞周期的重要转录因子,主要功能包括调节细胞周期、促进细胞凋亡、维持基因组稳定性和抑制肿瘤血管生成等,野生型的JP5是一个重要的抑癌基因,在抑制癌症发生过程中扮演重要的角色,因此被称为“基因组的守护者”。JP5全长393氨基酸,理论分子量为43.7kDa,1979年因其在SDS-PAGE凝胶电泳中展示的分子量约为53kDa而得名JP5,这种分子量的差异源自于JP5存在大量的脯氨酸残基,减缓了其在SDS-PAGE凝胶电泳中的迁移速度[1-2]。
pCMV-3X Flag-JP5质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide
Position

CMV promoter
235-818

3X Flag tag
907-972

human JP5
991-2169

bGH poly(A) signal
2274-2498

f1 ori
2544-2972

SV40 promoter
2986-3316

Neomycin resistance gene
3383-4177

SV40 poly(A) signal
4351-4472

ori
4923-5511

Ampicillin resistance gene
5682-6542
pCMV-3X Flag-JP5中没有的酶切位点包括:

AarI
AbsI
AccIII
Acc65I
AcvI
AflII
AgeI

AjiI
AleI
Aor13HI
AscI
AsiGI
AsiSI
AsJJP7I

AsuNHI
BaeI
BanIII
BarI
BbrPI
BfrI
BlpI

BmgBI
BmtI
Bpu1102I
Bsa29I
BseAI
BseCI
BshVI

BshTI
BsiWI
BsmBI
Bsp13I
Bsp1407I
Bsp1720I
BspDI

BspEI
BspOI
BspTI
BspXI
BsrGI
BJP908I
BstAFI

BstAUI
BstEII
BstENI
BstHPI
BstPI
Bsu15I
BsuTUI

BtrI
CelII
Cfr42I
ClaI
CspAI
Eco72I
Eco91I

EcoNI
EcoO65I
Esp3I
FseI
FspAI
HpaI
I-CeuI

I-PpoI
I-SceI
KflI
KpnI
Kpn2I
KspI
KspAI

MauBI
MreI
MroI
MspCI
MssI
NheI
OliI

PacI
PalAI
Pfl23II
PI-PspI
PI-SceI
PinAI
PmaCI

PmeI
PmlI
PpuMI
Psp5II
PspCI
PspEI
PspLI

PspPPI
PsrI
RgaI
RigI
SacII
SanDI
SbfI

SdaI
SfaAI
SfiI
Sfr303I
SgfI
SgrBI
SgsI

SmiI
SrfI
Sse8387I
SspBI
SstII
SwaI
Vha464I

XagI

pCMV-3X Flag-JP5中的单酶切位点包括:

AhdI
ApaI
AvrII
BamHI
BbvCI
BglII
BssHII

BstXI
BstZ17I
Bsu36I
CsiI
DraIII
EcoRI
EcoRV

KasI
MfeI
MluI
NarI
NdeI
NotI
NruI

PasI
PflFI
PfoI
PluTI
PshAI
PspOMI
PspXI

RsrII
ScaI
SexAI
SfoI
SgrAI
SgrDI
SmaI

SpeI
TspMI
Tth111I
XbaI
XhoI
XmaI

pCMV-3X Flag-JP5质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
CMV-F primer (769-789): 5′-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3′
BGH-R primer (2285-2268): 5′-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3′
pCMV-3X Flag-JP5的全序列信息:JP07031 pCMV-3X Flag-JP5-全序列.txt。
在HEK293T细胞(人胚肾细胞)中共转pCMV-3X Flag-JP5和pCMV-Myc-LTA (JP07036),经免疫共沉淀(Co-IP)实验验证,JP5和LTA两种蛋白可以相互作用,具体参考Flag&Myc Co-IP阳性对照质粒对(JP07041)。
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产品名称
包装

JP07031-1μg
pCMV-3X Flag-JP5
1μg

JP07031-100μg
pCMV-3X Flag-JP5
100μg


说明书
1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本质粒仅经过测序、免疫沉淀和免疫共沉淀验证,未经过功能性验证。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

DDK (FLAG) mouse monoclonal antibody, clone OTI11C3DDK(FLAG)小鼠单克隆抗体,克隆OTI11C3

 Product Data
Product Name DDK (FLAG) mouse monoclonal antibody, clone OTI11C3
Clone Name OTI11C3
Applications ICC, IHC, WB
Target DDK (FLAG tag): DYKDDDDK
Host Mouse
Clonality Monoclonal
Immunogen Anti-DDK monoclonal antibody is produced by immunizing mice with a synthetic peptide coupled to KLH
Isotype IgG1
Formulation PBS (PH 7.3) containing 1% BSA, 50% glycerol and 0.02% sodium azide.
Concentration 1 mg/ml
Conjugation Unconjugated
Storage Condition Store at -20°C.
Note This anti-DDK (FLAG) antibody recognizes both N-terminus and C-terminus DDK tags. It is recommended for Western blot only.

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The use of this Antibodies has been cited in the following citations:
Targeting codon 158 p53-mutant cancers via the induction of p53 acetylation ,Kong, LR;Ong, RW;Tan, TZ;Mohamed Salleh, NAB;Thangavelu, M;Chan, JV;Koh, LYJ;Periyasamy, G;Lau, JA;Le, TBU;Wang, L;Lee, M;Kannan, S;Verma, CS;Lim, CM;Chng, WJ;Lane, DP;Venkitaraman, A;Hung, HT;Cheok, CF;Goh, BC;, Nat Commun 2020 ,PubMed ID 32350249 [DDK]
Overexpression of Progerin Results in Impaired Proliferation and Invasion of Non-Small Cell Lung Cancer Cells ,Hu, XT;Song, HC;Yu, H;Wu, ZC;Liu, XG;Chen, WC;, Onco Targets Ther 2020 ,PubMed ID 32280239 [DDK]
Serine/threonine protein phosphatase 5 is a potential therapeutic target in cholangiocarcinoma ,Hu, MH;Huang, TT;Chao, TI;Chen, LJ;Chen, YL;Tsai, MH;Liu, CY;Kao, JH;Chen, KF;, Liver Int. 2018 ,PubMed ID 29797403 [DDK]
Unfractionated Heparin Alleviates Human Lung Endothelial Barrier Dysfunction Induced by High Mobility Group Box 1 Through Regulation of P38-GSK3β-Snail Signaling Pathway ,Luan, Z;Hu, B;Wu, L;Jin, S;Ma, X;Zhang, J;Wang, A;, Cell. Physiol. Biochem. 2018 ,PubMed ID 29719300 [DDK]
Inhibition of dihydrotestosterone synthesis in prostate cancer by combined frontdoor and backdoor pathway blockade ,Fiandalo, MV;Stocking, JJ;Pop, EA;Wilton, JH;Mantione, KM;Li, Y;Attwood, KM;Azabdaftari, G;Wu, Y;Watt, DS;Wilson, EM;Mohler, JL;, Oncotarget 2018 ,PubMed ID 29541409 [DDK]
TAOK1 negatively regulates IL-17-mediated signaling and inflammation ,Zhang, Z;Tang, Z;Ma, X;Sun, K;Fan, L;Fang, J;Pan, J;Wang, X;An, H;Zhou, J;, Cell. Mol. Immunol. 2018 ,PubMed ID 29400705 [DDK]
SMIT1 Modifies KCNQ Channel Function and Pharmacology by Physical Interaction with the Pore ,Manville, RW;Neverisky, DL;Abbott, GW;, Biophysical Journal 2017 ,PubMed ID 28793216 [DDK]
Exosomes expressing carbonic anhydrase 9 promote angiogenesis ,Horie, K;Kawakami, K;Fujita, Y;Sugaya, M;Kameyama, K;Mizutani, K;Deguchi, T;Ito, M;, Biochem. Biophys. Res. Commun. 2017 ,PubMed ID 28851650 [DDK]
Regulation of Peripheral Myelination through Transcriptional Buffering of Egr2 by an Antisense Long Non-coding RNA ,Martinez-Moreno, M;O'Shea, TM;Zepecki, JP;Olaru, A;Ness, JK;Langer, R;Tapinos, N;, Cell Rep 2017 ,PubMed ID 28834756 [DDK]
Involvement of p38-βTrCP-Tristetraprolin-TNFα axis in radiation pneumonitis ,Krishnamurthy, PM;Shukla, S;Ray, P;Mehra, R;Nyati, MK;Lawrence, TS;Ray, D;, Oncotarget 2017 ,PubMed ID 28548957 [DDK]
OCT4B1 regulates the cellular stress response of human dental pulp cells with ,Liu, L;Huang, R;Yang, R;Wei, X;, BioMed Research International 2017 ,PubMed ID 28473980 [DDK]
Phosphorylation of NFAT3 by CDK3 induces cell transformation and promotes tumor growth in skin cancer ,Xiao, T;Zhu, JJ;Huang, S;Peng, C;He, S;Du, J;Hong, R;Chen, X;Bode, AM;Jiang, W;Dong, Z;Zheng, D;, Oncogene 2016 ,PubMed ID 27893713 [DDK]